利用 X 射線三維顯微鏡對生物樣品進(jìn)行掃描，能夠?qū)崿F(xiàn)對生物組織結(jié)構(gòu)的無損三維可視化分析，但樣品制備環(huán)節(jié)需遵循嚴(yán)格規(guī)范，才能獲取高質(zhì)量成像數(shù)據(jù)。生物樣品具有含水量高、結(jié)構(gòu)脆弱、對輻射敏感等特性，制樣過程需兼顧樣品完整性、成像清晰度與實驗性。

　　樣品的預(yù)處理是制樣基礎(chǔ)。首先要確保樣品的新鮮度，對于動植物組織，采集后需立即處理，減少因細(xì)胞自溶、腐敗等導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)變化。若無法及時掃描，可將樣品浸泡于合適的固定液中，如常用的 4% 多聚甲醛溶液，通過交聯(lián)蛋白質(zhì)穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，防止在后續(xù)處理中發(fā)生變形。同時，需去除樣品表面雜質(zhì)和多余組織，例如植物樣品要修剪掉多余的葉片和莖稈，動物組織需剔除表面脂肪和結(jié)締組織，以避免干擾成像并提高掃描效率。

　　控制樣品尺寸與形態(tài)是關(guān)鍵要點。X 射線三維顯微鏡的掃描視野和穿透能力有限，需根據(jù)設(shè)備參數(shù)對樣品進(jìn)行合理切割。一般而言，樣品尺寸應(yīng)控制在設(shè)備有效掃描范圍內(nèi)，例如小型臺式設(shè)備通常適合直徑不超過 10mm、高度不超過 20mm 的樣品。對于較大樣品，可分割成多個小塊分別制樣。同時，要保證樣品形態(tài)規(guī)則，避免尖銳棱角或不規(guī)則凸起，防止局部過度吸收 X 射線，影響成像均勻性。此外，可將樣品嵌入合適的支撐介質(zhì)中，如瓊脂糖凝膠或石蠟，既維持樣品形態(tài)穩(wěn)定，又能輔助固定內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

　　減少水分干擾對成像質(zhì)量至關(guān)重要。生物樣品含水量高，而水對 X 射線吸收較強，易產(chǎn)生偽影。制樣時需采用脫水處理，常用梯度乙醇溶液（30%、50%、70%、85%、95%、100%）逐步置換樣品中的水分。脫水后，可進(jìn)行臨界點干燥或冷凍干燥，去除殘余水分。對于無法脫水的含水樣品，如活細(xì)胞或組織切片，可采用低溫掃描或水窗成像技術(shù)，但需選擇合適的載樣容器，如超薄的聚丙烯酰胺水凝膠膜，既能固定樣品，又能減少水分對 X 射線的吸收。

　　防護(hù)與兼容性同樣不容忽視。X 射線對生物樣品有輻射損傷，長時間照射會破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，制樣時應(yīng)盡量縮短掃描時間。可通過優(yōu)化掃描參數(shù)，如降低 X 射線劑量、減少掃描層數(shù)，在保證成像質(zhì)量的前提下，降低輻射對樣品的影響。同時，制樣過程中使用的試劑、支撐介質(zhì)等材料需確保與 X 射線不發(fā)生反應(yīng)，避免產(chǎn)生額外的干擾信號，影響成像結(jié)果的準(zhǔn)確性 。